RESULTA

En condiciones basales los valores de %POS y el IMFE de gp-P fueron similares para las líneas de túbulo renal (%POS MDCK: 83.65±22.71; IMFE MDCK: 22.6±2.1) (%POS LLC-PK1: 81.28±20.5; IMFE LLC-PK1: 27.9±5.1) y muy superiores en la línea control transfectada NIH-MDR-G185 (%POS: 99±0.1%; IMFE: 122.8±15.4). (Tabla 3).

Efecto de los Inmunosupresores en la Expresión de Glicoproteína P

La incubación con los IS modificó el valor de IMFE para la gp-P en ambas líneas (ANOVA, p<0.001), siendo desde los 7 días para la línea MDCK y a partir de los 15 días en la línea LLC-PK1. La mayor inducción la proporcionó AZA seguido por CsA y FK506. Así tras quince días de tratamiento para las dos líneas se mantuvo la inducción de gp-P frente a los cultivos control (ANOVA, p<0.01) excepto para FK506 que perdió la significación estadística. Comparando FK506 con CsA, esta última induce mayor expresión de gp-P de forma estadísticante significativa (Newman-Keuls, p<0.05) en las líneas de túbulo renal y en los dos tiempos analizados. (Tabla 3).

Efecto de los Inmunosupresores sobre el Ciclo Celular de MDCK

Los inmunosupresores modifican el porcentaje de células en las distintas fases del ciclo (ANOVA, p<0.001), esta diferencia también se encuentra cuando se analizan los ensayos a 7 y 15 días por separado (AN1, p<0.001), no existiendo prácticamente diferencias entre ambos tiempos evaluados (t-student, NS). Es AZA la que mayor cambio condiciona con disminución del porcentaje de células en G0/G1, gran aumento de células en S y fundamentalmente en G2/M con referencia a su control (N-K, p<0.01) y al resto de los inmunosupresores ensayados (N-K, p<0.01). Esta diferencia también se mantiene e incrememta a los 15 días (N-K, p<0.01). CsA y FK506 presentan un efecto proliferativo similar principalmente con un incremento significativo de FC de forma mantenida después de 15 días de incubación (N-K, p<0.01). (Tablas 4 y 5)

Efecto de los Inmunosupresores sobre el Ciclo Celular de LLC-PK1

Los inmunosupresores influyen en el porcentaje de células en las distintas fases del ciclo celular (ANOVA, p<0.001), esta diferencia también se detecta cuando se analizan los ensayos para los tiempos 7 y 15 días por separado (ANOVA, p<0.001), no existiendo diferencia significativa entre ambos tiempos (t-student, NS). La mayor significación la alcanzan AZA y CsA (Newman-Keuls, p<0.01), en el estudio de las modificaciones del ciclo a los dos tiempos ensayados, 7 y 15 días, para estos dos fármacos se producen diferencias significativas para ambos tiempos (Newman-Keuls, p<0.01), no van a existir diferencias significativas para ambos tratamientos entre las dos duraciones ensayadas (t-student, NS). FK506 también provoca una modificación en las distintas fases pero en menor medida (Newman-Keuls, p<0.05), cuando se estudian los ensayos de los diferentes tiempos, 7 y 15 días, por separado este efecto no se hace significativo (Newman-Keuls, NS) y no existen diferencias significativas para ambos tratamientos entre las dos duraciones ensayadas (t-student, NS). (Tablas 6 y 7).

Ensayo Funcional de la Glicoproteína P

En la línea transfectada NIH-MDR-G185 los ensayos con Rh123 ponen de manifiesto el efecto modulador de los IS sobre la gp-P. FK506 y CsA producen, de forma significativa, mayor acúmulo intracelular de Rh123 con referencia al bloqueante Verapamil y AZA es la que menor acumulo produjo; el efecto modulador es menos evidente en las líneas tubulares. (Tabla 8).

Fármacos (IC₇₀)	MDCK (IMFE)		LLC-PK1 (IMFE)
Fármacos (IC₇₀)	7 días	15 días	7 días†	15 días
Control	22.68±2.14*	27.70±4.09§	35.44±8.40	27.98±5.16§
AZA	39.98±3.08	53.97±3.27	34.40±3.09	45.13±7.40
CsA	34.63±3.13	37.40±3.83	37.03±5.72	40.23±3.94
FK506	38.67±4.67	30.70±0.76	34.73±4.80	27.60±2.86
IC₇₀: concenteración de fármaco que inhibe el crecimiento celular al 70%; IMFE: incorporación media de fluorescencia específica; 7 días: tiempo de incubación con fármacos de 6 días; 15 días: tiempo de incubación con fármacos de 14 días; Control: células no tratadas farmacológicamente; AZA: células tratadas con Azatioprina a una dosis de IC₇₀; CsA: células tratadas con Ciclosporina A a una dosis de IC₇₀; FK506: células tratadas con Tacrolimus^® a una dosis de IC₇₀.Valores expresados como media±s de un mínimo de tres experiencias independientes; *: Newman-Keuls p<0.01 de control vs todos; §: Newman-Keuls p<0.01 de control vs CsA y AZA; †: ANOVA no significativo.

Fármacos (IC₇₀)	MDCK 7 días
Fármacos (IC₇₀)	G0/G1	S	G2/M	FC
Control	83.01±6.13	14.03±6.12	2.93±1.14	16.96±6.10
AZA	32.02±6.54	30.20±13.72	37.43±18.09	68.13±6.37
CsA	71.04±5.62	21.88±3.54	7.06±3.18	28.94±5.61
FK506	71.98±7.65	21.85±5.80	6.20±1.92	28.05±7.52
IC₇₀: concenteración de fármaco que inhibe el crecimiento celular al 70%; 7 días: tiempo de incubación con fármacos de 6 días; G0/G1, S, G2/M y FC=S+G2/M: fases del ciclo celular; Control: células no tratadas farmacológicamente; AZA: células tratadas con Azatioprina a una dosis de IC₇₀; CsA: células tratadas con Ciclosporina A a una dosis de IC₇₀; FK506: células tratadas con Tacrolimus^® a una dosis de IC₇₀.Valores expresados como media±s de un mínimo de tres experiencias independientes.

Fármacos (IC₇₀)	MDCK 15 días
Fármacos (IC₇₀)	G0/G1	S	G2/M	FC
Control	88.75±7.16	8.98±7.14	2.25±1.03	11.23±7.19
AZA	21.80±11.28	27.74±6.53	50.62±6.35	78.36±11.23
CsA	75.12±10.89	22.50±10.55	2.36±0.59	24.86±10.86
FK506	77.73±1.71	19.10±1.44	3.23±0.44	22.33±1.69
IC₇₀: concenteración de fármaco que inhibe el crecimiento celular al 70%; 15 días: tiempo de incubación con fármacos de 14 días G0/G1, S, G2/M y FC=S+G2/M: fases del ciclo celular; Control: células no tratadas farmacológicamente; AZA: células tratadas con Azatioprina a una dosis de IC₇₀ ; CsA: células tratadas con Ciclosporina A a una dosis de IC₇₀; FK506: células tratadas con Tacrolimus^® a una dosis de IC₇₀.Valores expresados como media±s de un mínimo de tres experiencias independientes.

Fármacos (IC₇₀)	LLC-PK1 7 días
Fármacos (IC₇₀)	G0/G1	S	G2/M	FC
Control	81.75±6.45	15.82±5.59	2.57±1.03	18.38±6.58
AZA	40.48±11.89	38.42±5.01	21.08±8.42	59.50±11.83
CsA	62.92±3.01	27.26±2.73	9.86±3.24	37.12±3.00
FK506	74.05±5.08	23.10±4.60	2.93±1.91	26.03±5.11
IC₇₀: concenteración de fármaco que inhibe el crecimiento celular al 70%; 7 días: tiempo de incubación con fármacos de 6 días; G0/G1, S, G2/M y FC=S+G2/M: fases del ciclo celular; Control: células no tratadas farmacológicamente; AZA: células tratadas con Azatioprina a una dosis de IC₇₀; CsA: células tratadas con Ciclosporina A a una dosis de IC₇₀; FK506: células tratadas con Tacrolimus^® a una dosis de IC₇₀.Valores expresados como media±s de un mínimo de tres experiencias independientes.

Fármacos (IC₇₀)	LLC-PK1 15 días
Fármacos (IC₇₀)	G0/G1	S	G2/M	FC
Control	83.62±3.06	13.12±3.03	3.30±0.86	16.42±3.03
AZA	26.00±6.94	31.95±7.97	42.18±13.47	74.13±6.82
CsA	62.35±9.00	20.00±7.66	17.70±9.70	37.70±9.03
FK506	76.95±5.98	20.43±5.68	2.63±0.64	23.05±5.87
IC₇₀: concenteración de fármaco que inhibe el crecimiento celular al 70%; 15 días: tiempo de incubación con fármacos de 14 días G0/G1, S, G2/M y FC=S+G2/M: fases del ciclo celular; Control: células no tratadas farmacológicamente; AZA: células tratadas con Azatioprina a una dosis de IC₇₀; CsA: células tratadas con Ciclosporina A a una dosis de IC₇₀; FK506: células tratadas con Tacrolimus^® a una dosis de IC₇₀.Valores expresados como media±s de un mínimo de tres experiencias independientes.

Fármacos (30mM)	NIH-MDR-G185 (CMF)	Fármacos (IC₇₀)	MDCK (CMF)		LLC-PK1 (CMF)
Verapamil	120.4	Fármacos (IC₇₀)	7 días	15 días	7 días	15 días
Control	17.8	Control	155.2	114.5	134.5	148.6
AZA	21.2	AZA	181.8	136.2	217.9	127.9
CsA	155.9	CsA	81.5	124.0	165.3	144.8
FK506	153.9	FK506	99.5	137.5	164.3	130.2
CMF: canal medio de fluorescencia; Verapamil: células con Rh123 y verapamil 30mM; Control: células con Rh123; AZA: células con Rh123 y Azatiprina 30mM; CsA: células con Rh123 y CsA 30mM; FK506: células con Rh123 y Tacrolimus^®30 mM.		CMF: canal medio de fluorescencia; 7 días: tiempo de incubación con fármacos de 6 días; 15 días: tiempo de incubación con fármacos de 14 días; Control: células no tratadas farmacológicamente; AZA: células tratadas con Azatioprina a una dosis de IC₇₀; CsA: células tratadas con Ciclosporina A a una dosis de IC₇₀; FK506: células tratadas con Tacrolimus^® a una dosis de IC₇₀.

Efecto de Tacrolimus^® y Ciclosporina A sobre la Expresión de Glicoproteína P en Células Tubulares Renales en Cultivo.

Resultados

Expresión de Glicoproteína P en Condiciones Basales

Efecto de los Inmunosupresores en la Expresión de Glicoproteína P

Efecto de los Inmunosupresores sobre el Ciclo Celular de MDCK

Efecto de los Inmunosupresores sobre el Ciclo Celular de LLC-PK1

Ensayo Funcional de la Glicoproteína P

Francisco Arrebola, MS.
Copyright © 1996, Departamento de Anatomía Patológica, Facultad de Medicina y Hospital Universitario, Universidad de Granada, 18012 Granada, España. Reservados todos los derechos.

Efecto de Tacrolimus® y Ciclosporina A sobre la Expresión de Glicoproteína P en Células Tubulares Renales en Cultivo.

Resultados

Expresión de Glicoproteína P en Condiciones Basales

Efecto de los Inmunosupresores en la Expresión de Glicoproteína P

Efecto de los Inmunosupresores sobre el Ciclo Celular de MDCK

Efecto de los Inmunosupresores sobre el Ciclo Celular de LLC-PK1

Ensayo Funcional de la Glicoproteína P

Francisco Arrebola, MS. Copyright © 1996, Departamento de Anatomía Patológica, Facultad de Medicina y Hospital Universitario, Universidad de Granada, 18012 Granada, España. Reservados todos los derechos.

Efecto de Tacrolimus^® y Ciclosporina A sobre la Expresión de Glicoproteína P en Células Tubulares Renales en Cultivo.

Francisco Arrebola, MS.
Copyright © 1996, Departamento de Anatomía Patológica, Facultad de Medicina y Hospital Universitario, Universidad de Granada, 18012 Granada, España. Reservados todos los derechos.