APLICACIÓN DE LAS TÉCNICAS INMUNOHISTOQUÍMICAS AL ESTUDIO DE LOS SÍNDROMES LINFOPROLIFERATIVOS*

  Dr. Tomás Álvaro Naranjo, Dr. Ramón Bosch Príncep, Dra. Salomé Martínez González, Dra. Mª Teresa Salvadó Usach  

 3.- Marcadores inmunofenotípicos útiles en el diagnóstico y clasificación de los tumores linfoides en tejido procesado de forma rutinaria.

    El inmunofenotipo de los tumores hematopoyéticos puede estudiarse de dos formas, ya sea por citometría de flujo o por inmunohistoquímica. Cada una debe ser utilizada en función de los factores asociados al caso particular problema, dependiendo de las características de la enfermedad, la distribución de los Ag (nucleares, citoplásmicos o de superficie) y el tipo de muestra disponible para estudio.
    Los métodos inmunoquímicos pueden realizarse sobre extensiones citológicas, sobre tejido congelado o sobre bloques de tejido parafinados. Todos ellos son complementarios, cada uno posee sus ventajas e inconvenientes y el lector interesado en ellos debe recurrir a la abundante literatura científica específica disponible al respecto. El enfoque de este apartado de la conferencia se centra sobre una selección de marcadores especialmente útiles en el estudio de síndromes linfoproliferativos sobre tejido fijado en formol e incluido en parafina, por ser esta la situación más común ante la que se encuentra el patólogo.Cabe señalar aquí que la incorporación de nuevos Ac que funcionan correctamente en parafina, junto al avance en el conocimiento de métodos de desenmascaramiento antigénico, han hecho que los estudios en congelación hayan quedado restringidos a situaciones específicas, pudiendo estudiarse hoy correctamente la mayoría de los síndromes linfoproliferativos y entidades relacionadas sobre tejido procesado de forma rutinaria. Las ventajas de esta situación son una mayor facilidad de manejo y disponibilidad de material, el análisis retrospectivo sobre material de archivo y la mejor conservación arquitectural y citológica de la lesión objeto de estudio.
 

  
 Marcadores linfoides versus no linfoides

AG	REACTIVIDAD	PRECAUCIONES
CD45	Céls. B, céls. T, macrófagos, céls. Mieloides y sus tumores.	Las céls. plasmáticas y sus tumores suelen ser negativos, como también las céls. de R-S de la enf. de Hodgkin clásica, LACG y algunos linfomas linfoblásticos.
CD20	Pan B (excepto céls. Plasmáticas)	Identifica linfomas B carentes de Ig (diagnóstico diferencial con carcinoma indiferenciado y otros tumores no linfoides) ocasionalmente CD45 negativos (ej: linfoma B inmunoblástico).
Ig	Céls. B, céls. Plasmáticas y sus tumores.	Puede verse positividad citoplásmica difusa en macrófagos, céls. de R-S y céls. degeneradas de cualquier estirpe celular. La detección de Ig de superficie requiere tejido congelado. Normalmente presente en plasma (tinción de fondo real). La restricción de cadenas ligeras constituye por lo general evidencia de neoplasia. Es recomendable comparar ambas tinciones (k y l )
Lisozima	Macrófagos, céls. Mieloides. Linfoma histiocítico verdadero y leucemias mieloides.	Positividad en gran número de tumores no linfoides.
Proteína S-100	Céls. de Langerhans, IDRC y céls. Dendríticas foliculares, así como sus tumores. Linfoma histiocítico verdadero.	También son positivas las leucemias mieloides, algunos linfomas T y los histiocitos de la enf. De Rosai-Dorfman. Tumores neurales, melanoma, algunos sarcomas y carcinomas (de mama).
Mielo-peroxidasa	Céls. mieloides, leucemias mieloides.	Es el marcador más específico para los tumores mieloides.
EMA	Céls. plasmáticas y sus tumores, EHPLN y muchos LACG	También pueden ser positivos algunos linfomas de células grandes B y T.
CK	Céls. epiteliales y sus tumores.	Las células plasmáticas y sus tumores, así como algunos otros linfomas pueden ser ocasionalmente positivos.
Vimentina	Células linfoides	Carente de valor discriminante entre linfoma y otros tumores.
Otros	CEA, cromogranina, desmina, .........

 
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Marcadores de linfocitos B y sus tumores
 
    Los marcadores inmunohistoquímicos útiles para distinguir una proliferación linfoide B maligna de una reactiva son la restricción de cadenas ligeras, la ausencia de ag expresados en condiciones normales y la expresión anormal de Ag.
    En condiciones normales la cantidad de células que expresan cadena ligera de tipo kappa es como mínimo el doble que las que tienen lambda, por lo que un predominio de las últimas debe ser interpretada con un alto índice de sospecha. La restricción de cadena ligera de tipo kappa o lambda es un marcador fiable de malignidad, lógicamente en un contexto clínico apropiado (existen expansiones B monoclonales asociadas a estados de inmunodeficiencia que no se comportan clínicamente como malignas y, de forma excepcional, es posible identificar restricción de cadenas ligeras en lesiones benignas).
    La ausencia de Ag normalmente expresados por células B es otro indicador de malignidad. Alrededor del 25% de linfomas B no expresan Ig y la ausencia de cualquiera de CD19, CD20, CD22 ó CD24 en una proliferación linfoide B puede ser considerada como un inmunofenotipo aberrante. La excepción corresponde a las células plasmáticas que, al representar células B plenamente maduras no expresan CD20 ni CD22.
    De gran interés es la expresión anómala de un Ag, que constituye por sí sola indicador fiable de malignidad. Tal el vez el ejemplo más claro sea la expresión de CD5, un marcador de células T que se encuentra en LLC-B y linfoma del manto. Lo mismo ocurre con CD43, otro marcador T que no es expresado normalmente por células B. Tampoco CD10 es expresado habitualmente por las células del centro germinal, pero sí por linfoma folicular, lo que puede ser utilizado en el diagnóstico diferencial entre linfomas de bajo grado con patrón folicular. Como queda dicho, todos estos marcadores funcionan en la actualidad perfectamente en material parafinado.
    La siguiente tabla recoge de forma sinóptica información clave referente a patrones de reactividad, precauciones y
datos interpretativos de algunos marcadores B.
 
 

Ag.	REACTIVIDAD	PRECAUCIONES
bcl-2	Céls. B de fuera del centro germinal, mayoría céls. T, céls. plasmáticas. Los folículos primarios (sin centro germinal) son positivos.	Su uso diagnóstico principal radica en la identificación de linfomas foliculares vs procesos reactivos.
CD20	Céls. B y la mayoría de linfomas B. Tinción más fuerte sobre céls. del centro germinal que sobre linfocitos de la zona del manto. Céls. L&H de EHPLN. L26 tiñe céls. dendríticas foliculares.	La mayoría de céls. Plasmáticas y sus tumores son negativos, pueden ser positivos macrófagos, céls. R-S, algunos linfocitos T y timomas. Patrón característico de LBRCT. No es útil para distinguir proliferaciones benignas de malignas. Permite realizar el diagnóstico diferencial entre linfoma B Ig negativo y carcinoma indiferenciado u otros tumores y entre linfoma B y T. Frecuentemente se observa tinción de céls. de músculo liso.
CD21	Céls. B del manto y zona marginal, céls. Dendríticas foliculares.	Los patrones específicos de red de céls. dendríticas de diferentes tumores le confieren especial interés en la subclasificación de estos tumores (ídem Ac DRC).
CD30	Céls. B y T activadas, céls. Plasmáticas. Céls. R-S, LACG.	En las linfadenitis reactivas es posible ver algunas céls. positivas. Algunos linfomas B y T pueden mostrar diferentes grados de positividad. La tinción citoplásmica puede ser inespecífica. Céls. L&H negativas.
CD43	Céls. T, algunas céls. B de la zona del manto folicular y céls. Plasmáticas.	LLC-B, linfomas de céls. Del manto y linfomas tipo MALT (40%) son positivos. Los linfomas de céls. del centro folicular son negativos.
CD45RA	Céls. B y algunas céls. T. La mayoría de los linfomas B.	Los tumores de céls. Plasmáticas son negativos. En cambio son positivos algunos linfomas T, las céls. L&H del EHPLN y algunas leucemias mieloides.
CD5	Céls. T, linfocitos B que producen autoanticuerpos.	Son positivos gran número de linfomas difusos B de céls. pequeñas (LLC, linfomas de céls. del manto,...).. Los linfomas de céls del centro folicular y los linfomas tipo MALT son negativos.
CD68	Marcador mielomonocítico.	Son positivos los linfomas nodales B difusos de céls. grandes (generalmente negativos los extranodales) y muchos otros linfomas y leucemias. El linfoma de Burkitt es negativo. Son positivos muchos linfomas B de céls. pequeñas y leucemias, incluyendo LCP. También son positivos algunos linfomas B difusos de céls. grandes.
CD74	Céls. B, CDI, algunos macrófagos y céls. de Langerhans. La mayoría de linfomas B.	Pueden mostrar positividad algunos linfomas T, céls. de R-S, histiocitosis de céls. de Langerhans y leucemias mieloides.
CD75	Céls. B y la mayoría de linfomas B, sobre todo folicular y de alto grado.	Pueden ser positivos algunos linfomas T, céls. L&H y céls. de R-S. También céls. epiteliales. Algunos linfomas B de céls. pequeñas son negativos.
CD79	Céls. B y la mayoría de linfomas B.	Las céls. plasmáticas son negativas. Las leucemias en estadio pre-B son positivas.
Ciclina D1
Ig	Céls. B, céls. Plasmáticas y sus tumores.	Puede verse positividad citoplásmica difusa en macrófagos, céls. de R-S y céls. degeneradas de cualquier estirpe celular. La detección de Ig de superficie requiere tejido congelado. Normalmente presente en plasma (tinción de fondo real). La restricción de cadenas ligeras constituye por lo general evidencia de neoplasia. Es recomendable comparar ambas tinciones (k y l ).
LMP-1	Céls. Infectadas con virus Epstein-Barr.	Céls. R-S, mayoría de linfomas asociados a inmunodeficiencia.
MB2	Céls. B, algunos macrófagos. Mayoría de linfomas B.	Algunos linfomas T son positivos. También tiñe céls. epiteliales y endoteliales.
MT2	Detecta un Ag. CD45R presente en la mayoría de céls. T y algunas céls. B.	Muchos linfomas B son positivos, particularmente de céls. Pequeñas y foliculares. Sólo unos pocos linfomas T son positivos. Puede utilizarse en el diagnóstico diferencial entre linfomas foliculares e hiperplasia reactiva.
p53	Céls. no tumorales muestran muy bajos niveles de expresión.	En linfadenitis reactivas la positividad es sólo ocasional. La mayoría de linfomas de bajo grado muestran escasa o nula expresión. En linfomas de alto grado, altos niveles predicen dificultad en la consecución de remisión completa. Las céls de R-S son generalmente positivas.
TdT	Céls. precursoras en médula ósea, timocitos corticales. Leucemias y linfomas linfoblásticos B y T.	También son positivas algunas leucemias mieloides.

 
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Marcadores de los linfocitos T y sus tumores
 
    Los hallazgos inmunohistoquímicos que permiten distinguir entre una proliferación linfoide T maligna y una reactiva son la ausencia de uno o más Ag t expresados en condiciones normales, la coexpresión CD4/CD8 en otrs localizaciones distintas al timo y la expresión anómala de ag, como Tdt ó CD1 fuera del timo.
    La interpretación de inmunofenotipo aberrante en la micosis fungoide es peculiar, ya que CD7 se pierde también en células T benignas de lesiones inflamatorias de la piel

AG	REACTIVIDAD	PRECAUCIONES
CD15	Granulocitos, macrófagos, céls. R-S.	Las céls. grandes de algunos linfomas T pueden ser positivos.
CD1a	Timocitos corticales, céls. Langerhans.	Linfoma linfoblástico de céls. T positivo.
CD3	Céls. T y mayoría linfomas T	Puede verse tinción inespecífica en el citoplasma de macrófagos y céls. plasmáticas. Hasta ahora no se ha encontrado en ningún subgrupo de linfomas B. Combinado con CD5 es útil en la identificación del grupo de linfomas B CD5 positivos.
CD30	Céls. B y T activadas, céls. Plasmáticas. Céls. R-S, LACG.	Algunos linfomas T son positivos.
CD43 (MT1)	Céls. T, algunas céls. B de la zona del manto, células plasmáticas, macrófagos, granulocitos, céls. de Langerhans. Mayoría de los linfomas T.	Son positivas las leucemias mieloides, algunos linfomas B, tumores de céls. plasmáticas e histiocitosis de céls. de Langerhans. Es más sensible pero menos específico que CD45RO. De gran utilidad diagnóstica en combinación con marcadores B.
CD45 RO	Mayoría de céls. T (25-50% de céls. T negativas), granulocitos, algunos macrófagos. Mayoría de linfomas T.	Son positivas las leucemias mieloides, algunos tumores de céls. plasmáticas y unos pocos linfomas B.
CD5	Céls. T, algunas céls. B. Mayoría de leucemias y linfomas T.	Muchos linfomas difusos de células pequeñas que son positivos son B, aunque la intensidad de tinción es menor que sobre las céls. T.
CD57	Céls. T del centro germinal, algunas céls. NK.	Son positivos algunos linfomas linfoblásticos y tumores de céls. NK.
EMA	Células plasmáticas.	Algunos linfomas de células grandes T y B. LACG
Proteína S-100	Céls. de Langerhans, CDI y céls. dendríticas foliculares, así como sus tumores. Linfoma histiocítico verdadero.	Raros linfomas T son positivos.
TCR (b F1)	Células T y mayoría de linfomas T.	Equivalente a CD3 en especificidad pero con intensidad de la tinción más débil. Puede detectarse en parafina tras digestión con pronasa. Algunos linfomas de céls. grandes son negativos.
TdT	Céls. precursoras en médula ósea, timocitos corticales. Leucemias y linfomas linfoblásticos T y B.	Timomas, algunas leucemias mieloides agudas.

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Marcadores de histiocitos, células dendríticas y sus proliferaciones y tumores
 
 

AG	REACTIVIDAD	PRECAUCIONES
CD15	Granulocitos, monocitos, mayoría de céls. R-S, enfermedad de Hodgkin excepto EHPL	Histiocitosis de céls. de Langerhans y tumores de céls. dendríticas negativos. Son positivas algunas leucemias mieloides, linfomas T y tumores no linfoides.
CD1a	Céls. Langerhans, timocitos corticales. Histiocitosis de céls. Langerhans.	Son positivos muchas leucemias y linfomas T tímicos. Numerosas céls. positivas en timomas.
CD21	Algunas células B, CDF	Son positivos los tumores de céls. dendríticas foliculares.
CD30	Céls. B y T activadas. Céls. R-S, LACG.	Células positivas en enfermedad Rosai- Dorfman.
CD43	Céls. T, monocitos, céls. NK, céls. Langerhans, céls. Plasmáticas.	Son positivas leucemias mieloides e histiocitosis de céls. de Langerhans
CD45	Pan leucocitario. Monocitos, macrófagos.	Histiocitosis de céls. de Langerhans y tumores de céls. dendríticas son por lo general negativos o débilmente positivos.
CD68 (KP1)	Macrófagos, céls. Mieloides. Leucemias mieloides, sarcoma histiocítico verdadero, histiocitosis de céls. Langerhans.	Son positivos buen número de leucemias y linfomas B de céls. pequeñas, leucemias de céls. peludas, mastocitosis, melanomas, sarcomas y carcinomas.
CD74	Céls. B, CDI, algunos macrófagos y céls. de Langerhans. Histiocitosis de céls. Langerhans.	Son positivos la mayoría de linfomas B, algunos linfomas T y leucemias mieloides.
HLA-DR	Céls. B y T activadas. Monocitos-macrófagos, céls. dendríticas.	Son positivos histiocitosis de céls. de Langerhans y tumores de céls. dendríticas.
Lisozima	Macrófagos, céls. Mieloides, leucemias mieloides, sarcoma histiocítico verdadero.	Son positivos gran número de tumores no linfoides. También pueden ser positivos linfomas B y T.
Mac-387	Macrófagos, céls. Mieloides, leucemias mieloides, sarcoma histiocítico verdadero.	Algunos carcinomas positivos.
Mielo-peroxidasa	Granulocitos.	Útil en la identificación de infiltrados leucémicos con diferenciación granulocítica.
Proteína S-100	Céls. Langerhans, CDI, céls. dendríticas foliculares y sus tumores.	Son positivos raros linfomas T, enf. Rosai-Dorfman y gran número de tumores no linfoides.

 
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 Marcadores asociados a enfermedad de Hodgkin
 
     La enfermedad de Hodgkin es una entidad clínico-patológica que se caracteriza por una población celular predominantemente reactiva que acompaña a las células que verdaderamente constituyen el tumor.
    Los estudios inmunohistoquímicos muestran una clara diferencia entre el subtipo predominio linfocítico y el resto de subtipos, que constituyen lo que se conoce como "formas clásicas" de enfermedad de Hodgkin. El reconocimiento del linfoma anaplásico de células grandes como una entidad clínico-patológica ha hecho desaparecer prácticamente el subtipo deplección linfocítica de enfermedad de Hodgkin.
 
 

AG	REACTIVIDAD	PRECAUCIONES
CD15	Granulocitos, monocitos, céls. T activadas.	Las céls. de R-S son positivas en la mayoría de los casos (80%). Su ausencia en un tumor con la morfología típica no excluye el diagnóstico. Pueden ser positivas céls. grandes en linfomas B y T, leucemias mieloides, céls. infectadas por CMV y carcinomas. Céls. L&H negativas.
CD20	Pan B, a veces macrófagos. Céls. L&H en EHPLN	Las céls. de R-S son positivas en alrededor 20% de Hodgkin clásico. Los linfocitos acompañantes en EHPLN son mayoritariamente B.
CD21	Céls. B, céls. Dendríticas foliculares.	El patrón de céls. dendríticas foliculares posee significado pronóstico en enfermedad de Hodgkin.
CD3	Pan T, mayoría de linfomas T.	La mayoría de los linfocitos acompañantes en la enf. de Hodgkin clásica son T.
CD30	Céls. T y B activadas, céls. plasmáticas, LACG (aquí la mayoría de las céls. son positivas).	Las céls. de R-S son positivas en la mayoría de los casos (90%). Pueden ser positivos algunos linfomas B y T, tumores de céls. plasmáticas, carcinoma embrionario y otros tumores no linfoides. Por sí mismo no es diagnóstico de ninguna enfermedad. Las céls. L&H pueden ser negativas en parafina. Por sí mismo no es diagnóstico de ninguna entidad.
CD40	Céls. B, CDI	Céls. de R-S positivas en alrededor del 70% de los casos.
CD43	Céls. T, céls. Plasmáticas, algunos macrófagos, granulocitos, céls. Langerhans.	Céls. de R-S positivas en alrededor del 10% de los casos.
CD45	Panleucocitario, monocitos, macrófagos.	Las céls. de R-S son generalmente negativas. Las céls. L&H positivas. Algunos LACG pueden ser negativos.
CD45RA	Céls. B y algunas céls. T	Las céls. L&H son positivas en EHPLN
CD45RO	Céls. T, macrófagos, granulocitos.	Céls. de R-S positivas en alrededor del 10% de los casos.
CD57	Céls. T, subgrupo de céls. NK.	De forma característica son positivas las céls. T que constituyen rosetas alrededor de céls. L&H.
CD74	Céls. B,CDI, algunos macrófagos y céls. Langerhans.	Las céls. de R-S son generalmente positivas.
CD75	Céls. B, céls. L&H en EHPLN	Las céls. de R-S pueden ser positivas (Hodgkin clásico).
EMA	Céls. plasmáticas, céls. epiteliales.	Las céls. L&H de EHPLN son positivas y también muchos LACG.
HLA-DR	Céls. B y T activadas, monocitos-macrófagos, céls. Dendríticas.	Céls. de R-S generalmente positivas.
Ig	Céls. B y céls. Plasmáticas.	Puede haber tinción citoplásmica difusa en macrófagos, céls. de R-S y céls. degeneradas.
LMP-1	Céls. infectadas por virus Epstein-Barr.	Las céls. de R-S son positivas frecuentemente.
P53	Proteína supresora de tumores.	Las céls. de R-S son positivas en la mayoría de los casos.
S-100	Céls. de Langerhans, CDI, etc.	Numerosas células acompañantes positivas.

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info@conganat.org

CopyRight Dr. Tomás Álvaro Naranjo, Dr. Ramón Bosch Príncep, Dra. Salomé Martínez González, Dra. Mª Teresa Salvadó Usach , 1998.
Última actualización: 01 noviembre 1998 22:08