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MESA REDONDA NUEVAS TECNOLOGÍAS
SALA BONN Utilización de la Citología Líquida -Procesador ThinPrep- en el diagnóstico citológico. Mª DEL CARMEN GARCÍA MACÍAS INTRODUCCIÓN: Desde 1940 en que el Dr. George Papanicolaou introdujo su técnica, que todos conocemos como Citología Convencional o Pap test, para el diagnóstico de la patología de cervix, especialmente para el diagnóstico precoz del cáncer, científicos y clínicos han intentado desarrollar un sistema que pudiera mejorar la calidad de las muestras de la citología convencional, para que su screening y diagnóstico pudieran ser más claros, seguros y fáciles de realizar. En 1996,después de años de trabajo e investigación, en Cytyc Corporation, the United States Food and Drug Administration, aprobó el procesador ThinPrep Pap Test, un Sistema de Citología Líquida, concluyendo que era significativamente más efectivo que la tradicional citología convencional para la detección de la presencia de células atípicas, cáncer cervical o lesiones precursoras (Lesiones Intraepiteliales Escamosas de bajo y alto grado (LSIL y HSIL), en el cervix, así como otras alteraciones citológicas definidas por el Sistema Bethesda para los diagnósticos citológicos de Vagina y Cervix, en una gran variedad de pacientes. Actualmente más del 80% de los Pap Test en USA son procesados con este método y su rendimiento, sensibilidad y especificidad están validadas por numerosas publicaciones científicas. En España, el ThinPrep Pap Test 2000 está instalado en la actualidad, en 21 Hospitales, siendo el nuestro, el Hospital Universitario de Salamanca el primero que lo puso en funcionamiento, a finales de 1999, procesando actualmente el 100% de las Citologías exfoliativas ginecológicas, el 100% de las exfoliativas no ginecológicas, especialmente las orinas, BAS, BAL, líquidos de cavidades y LCR, así como el material de PAAF de aquéllas patologías como las de mama, ganglios linfáticos o tiroides, donde realizamos técnicas de Inmunocitoquímica para diagnóstico ó factores pronósticos. Además de procesar las citologías exfoliativas ginecológicas, también procesa el resto de citologías exfoliativas no ginecológicas y el material obtenido mediante PAAF, con las ventajas que expondremos más adelante. Además del Procesador ThinPrep 2000, que solamente puede procesar una muestra cada vez, Cytyc Corporation ha desarrollado otra nueva máquina, el ThinPrep 3000, tambien de Citología Líquida, capaz de procesar 80 muestras a la vez, hecho que facilita en gran manera el trabajo en el Laboratorio además de incrementar la productividad. MATERIAL Y MÉTODO: El Procesador ThinPrep 2000 es una máquina capaz de procesar una muestra cada vez, en Citología Líquida, tanto de citología exfoliativa ginecológica, como la no ginecológica y también preparar muestras obtenidas mediante Punción Aspiración con Aguja Fina (PAAF) especialmente de tumores de mama, tiroides y patología de ganglio linfático. El Procesador ThinPrep 3000, tiene el mismo sistema de trabajo que el 2000, pero es capaz de procesar 80 muestras a la vez. Ambas máquinas son un instrumento mecánico complejo que constan de: un mecanismo responsable que controla el vial (que contiene metanol, como líquido fijador de citología líquida junto con la muestra que se desea estudiar). El TranCyt filtro, que es un tubo cilíndrico. Un sistema para colocar el porta especialmente diseñado para el ThinPrep (con una barrera circular que delimita el área a estudiar, mucho menor que la de la Citología Convencional). Frasco con alcohol de 96º, donde coloca el porta una vez finalizado el proceso. El Proceso del trabajo de ambas máquinas constan de tres fases: -Dispersión: Homogeniza y randomiza el material dentro del vial, dispersando las células. -Selección del material: las células se adhieren en monocapa al filtro. Los poros del filtro hacen una buena selección de las células no dejando pasar la sangre, el moco,y la mayor parte de leucocitos polimorfonucleares neutrófilos, dejando el fondo de la preparación muy limpia. -Transferencia celular: El filtro se invierte y transporta las células que ha captado del vial al porta colocado en la parte superior de la máquina. Este proceso se puede repetir con el mismo vial y obtener varios portas, dependiendo el nº, de la cantidad de celularidad que hubiera en la muestra recibida, con la misma calidad citológica. Las Muestras que se pueden procesar son: 1.- Citología Exfoliativa Ginecológica: El ginecólogo toma una muestra del fondo de saco vaginal, otra de exocervix y la tercera de endocervix (como se hace para la Citología Convencional), con un cepillo o espátula y vierte todo el material arrastrado, en el vial con metanol, lavandolo en el fondo del frasco,, rotando el cepillo en el sentido contrario a las agujas del reloj, y así no quedarán restos de células en el cepillo. 2.- Citología Exfoliativa no Ginecológica: Orinas, Líquidos de cavidades (Líquidos ascítico, pleural, pericárdico, cefalorraquídeo), Esputos, BAS, BAL, etc. Los líquidos se centrifugan y el sedimento se introduce en el vial de ThinPrep y la máquina lo procesa . 3.- Material obtenido mediante PAAF de diferentes órganos, especialmente cuando se desea realizar estudios de Inmunocitoquímica como: -Mama: en caso de sospecha de carcinoma, se realiza una PAAF de más, y su material se vierte , lavando además la aguja para aprovechar todo el material, en el vial con metanol de ThinPrep, y así podemos obtener varios portas para estudio de Inmunocitoquímica ( Receptores de Estrógenos, de Progesterona, Cerb2, p53, Mib1 y Cadherina E). -Ganglios Linfáticos: En caso de sospecha de Linfoma, Hodgkin o no Hodgkin, se toma muestra para estudio Inmunocitoquímico y así poder realizar diferentes paneles de células B ó T y tener la posibilidad de tipificar el fenotipo. -Tiroides, próstata, partes blandas, etc...se procesa de la misma manera realizando una PAAF de más cuando sospechamos que necesitaremos realizar estudios especiales y vamos a necesitar más número de portas, y así no tendremos que repetir la muestra. RESULTADOS: Los resultados de nuestra experiencia de tres años de trabajo con el Procesador ThinPrep 2000 (tenemos ya dos máquinas trabajando a la vez) corroborados con la experiencia de más años, de Citopatólogos norteamericanos, publicadas en numerosos trabajos científicos de prestigio internacional, como Acta Cytológica o Diagnostic Citopathology, no ofrecen duda en cuanto a la elección de este método de citología líquida para mejorar la calidad del diagnóstico en nuestros Laboratorios. Somos conscientes de que la rentabilidad y eficacia del screening cervical depende de la posibilidad de diagnosticar lesiones precancerosas (sensibilidad ) y al mismo tiempo evitar de falsos positivos en nuestros diagnósticos (especificidad), y por supuesto tanto o más importante que ésto es la seguridad en la interpretación citológica . La citología Convencional tiene falsos negativos (10-50%, dependiendo de los Laboratorios) y de éstos, el 90% son debidos a las limitaciones en la preparación de la muestra, ya que la extensión es capa gruesa, con grandes placas, el fondo generalmente es sucio, con gran cantidad de sangre, a veces, moco, leucocitos polimorfonucleares, con lo que la lectura de la preparación es difícil y a veces se puede no encontrar células atípicas aisladas ó en pequeños grupos, que nos harían dar un falso negativo con facilidad. Las ventajas de la Citología Líquida, y especialmente del Procesador ThinPrep 2000 son: Se pueden obtener más de un porta del mismo vial, con lo cual podemos realizar técnicas complementarias (en la misma muestra de la paciente y no tendría que repetirse la prueba con las molestias que ello conlleva) como: *Hybrid Capture, Hibridación in situ mediante Inmunocitoquímica y PCR, en la citología ginecológica, para poder diagnosticar el genotipo en la infección por HPV, de gran importancia para el diagnóstico precoz del cáncer de cervix, así como la p16 y PCR en el estudio de lesiones de ASC-US y ASC-H para poder descartar la presencia de HPV. *Receptores de estrógenos , receptores de progesterona, Cerb2, Mib1, p53 y Cadherina E, en los carcinomas de mama. Ya están estandarizados con un buen rendimiento en la técnica, gracias a que los portas procesados con este método, muestran fondo muy limpio (no enmascara las células con sangre, tan frecuentemente observadas en los carcinomas de mama)y la celularidad dispuesta monocapa facilita la lectura y contaje para poder hacer una valoración correcta de estos factores pronósticos tan importantes para el tratamiento de la paciente. La correlación con los resultados obtenidos en los mismos casos en la histología es muy alta. *CD30, CD15, CD20, CD3, CD5, bcl2, bcl6, CD10, etc....son tests realizados en los frotis de ganglios linfáticos, para poder tipificarlos, y realizar su fenotipo, siempre que sea posible, y lo más importante, poder diferenciar ganglios linfáticos reactivos de lesiones linfoproliferativas de bajo grado. De esta forma es posible evitar en algunos casos, la extirpación de la adenopatía para realizar el estudio anatomopatológico. * Lesiones de partes blandas o tumores malignos indiferenciados, permite realizar el panel de Inmunocitoquímica para diferenciar lesiones epiteliales, de conjuntivas o hematológicas, con lo que evitaría realizar la biopsia. * En casos de problemas diagnósticos en celularidad obtenida de Líquidos de Cavidades (hecho muy frecuente) para descartar malignidad (diagnóstico diferencial entre células mesoteliales reactivas y mesotelioma maligno) o saber si la malignidad es de origen mesotelial o es metástásica. Se realizan paneles de Inmunocitoquímica como CEA, Citoqueratinas, EMA, etc... *En BAL, en caso de sospecha de infección se pueden realizar diferentes técnicas como la Plata metenamina, PAS, etc...para identificar el agente responsable. En todos estos casos, nuestros resultados han sido muy buenos y serán presentados y discutidos con el resto de los componentes de la Mesa Redonda. CONCLUSIONES: Por todo lo anteriormente expuesto se puede concluir que : *el Sistema ThinPrep 2000 y por supuesto el 3000, muestran grandes ventajas por el incremento en la detección tanto de lesiones de bajo grado de malignidad como de lesiones más severas, de alto grado, además de reducir los falsos negativos en la citología exfoliativa ginecológica. * Después de realizado el diagnóstico citológico en el primer porta obtenido del vial, podemos realizar test complementarios , ya que quedan más células en el vial, bien preservadas. *Las células se conservan bien preservadas en el vial, durante 4-6 semanas en medio ambiente, y al menos 1 año en frigorífico: Este dato es muy importante pues se pueden realizar test complementarios pasado ese tiempo (si se desean hacer revisiones ) sin tener que repetir la prueba a la paciente. La única desventaja que los responsables de los Hospitales aducen para no montar en los Dpto. de Anatomía Patológica el ThinPrep es el coste: Esto es un hecho real , pues resulta más caro que el porta de la Citología Convencional. Pero si sumamos las molestias que podemos ahorrar a la paciente, al no tener que repetir toma de citología o evitarle la biopsia diagnóstica, y a la Administración del Hospital el ahorro a nivel económico, disminuyendo la lista de espera del Ginecólogo (al no tener que realizar una nueva citología o la toma de una biopsia ), disminuyendo el nº de biopsias peroperatorias en las lesiones de mama (ya que el diagnóstico y estudios complementarios se realizan con gran fiabilidad con este método de procesamiento), evitando extirpaciones de adenopatías para el diagnóstico y tipificación histológica etc...
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| © SEAP. Sociedad Española de Anatomía Patológica | Actualizado: 09/07/2003 |
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